细胞培养已成为生物系统建模的最基本技术之一，在生物技术和制药领域的重要性与日俱增，也是生命科学研究实验室的一项基本流程。虽然这种技术非常容易获得，但成功繁殖细胞用于扩增种群或建模实验可能会受到污染或其他条件的困扰，从而对细胞活力产生负面影响。共用细胞的常见做法已导致细胞种群交叉污染的证据被广泛公布，而这些细胞种群的身份以前是不容置疑的。找出细胞无法茁壮成长的常见和非常见原因，可以提高实验室效率、提高细胞产品的产量，并确保从体外模型中获得有意义、可靠的下游数据。

细胞系的错误鉴定

最近的研究估计，错误鉴定可能会影响多达三分之一的在用细胞系。这些发现有可能使基于细胞系模型结果发表的生物系统研究结果受到质疑。导致细胞系识别错误/交叉污染的因素包括：

• 侵袭性细胞系污染：同工酶分析表明，许多细胞系与 HeLa 细胞共享一种罕见的酶同工酶。此后的研究表明，HeLa 是培养基中最常见的侵袭性细胞系。

• 记录和标记方法：细胞培养瓶、平板、低温瓶和冷冻箱必须贴上清晰的标签，并严格保存液氮储存图，以反映细胞储量的添加、撤回和转移：相邻实验室之间共享细胞是一种常见的做法，会导致细胞系身份的错误。细胞系只能从声誉良好的细胞库获得，如英格兰公共卫生局的欧洲鉴定细胞培养物收集中心（ECACC）。

了解细胞系交叉污染的常见原因以及如何保护您的工作免受其后果的影响。

细胞培养物的微生物污染

细胞培养基和培养条件为细胞以及细菌、真菌和病毒污染物提供了理想的环境。为了进一步严格遵守无菌培养技术，必须定期对培养物进行显微镜检查，以发现细菌和真菌入侵的迹象。一些无处不在的微生物污染物会逃避肉眼检测，据估计，高达 30% 的培养物会受到支原体的污染。用于检测隐形支原体的试剂和试剂盒通常基于 PCR 扩增技术，这种技术也可用于检测病毒污染物。

细胞生长不良

如果培养的细胞看起来很健康，但却无法达到汇合状态，这令人沮丧。在排除污染物的情况下，细胞健康倍增的一些可能障碍包括：

• 培养/冷冻培养基的条件和质量

• 补充剂的质量和应用适用性

• 冷冻或通过过程中细胞计数不准确




当细胞看似有活力但无法扩增时，了解如何改善培养条件以获得最佳生长，然后再回到液氮中。

粘附细胞表型的分离

粘附细胞可在培养过程中自发分离，无论是单个还是成片。当粘附培养物不能保持粘附状态时，要知道要检查什么以及如何恢复培养物的粘附性.

细胞结块

悬浮液中的细胞模拟体内条件下的单细胞。当细胞开始结块时，这可能是由于培养基受压时，培养基中存在粘性核酸。培养基中隐藏着什么会导致细胞结块？ 在这里阅读更多有关如何消除培养物结块的信息。

细胞在培养过程中死亡

当细胞在培养过程中死亡时，首先必须排除微生物污染。可能导致细胞健康不良或行为与表型不一致的其他因素包括：

• 冷冻库存

  • 冻存条件

  • 细胞通过数/过度融合

  • 环境压力

  • 解离酶过度消化

  解决意想不到的细胞培养结果。

培养基中的沉淀物

如果不是污染，培养基中的微粒往往是无机物。了解平衡缓冲液和培养基成分，并学习更多有关保持培养基成分悬浮的知识.